Cancer metastasis inhibitor containing a streptococcus agalactiae Ia type or Ib type surface polysaccharide as a main ingredient Рак метастазированием ингибитор содержащий Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа поверхности полисахаридной качестве основного ингредиента Document Type and Number: Документ тип и номер: United States Patent 5939404 Патент США 5939404
Abstract: Аннотация: The present invention relates to the technology for inhibiting the cancer metastasis, and is aimed at the provision of a pharmaceutical composition for effectively inhibiting the metastasis of the cancer. В настоящее изобретение относится к технологии сдерживает рак метастазы, и направлен на создание фармацевтической композиции для эффективного затруднение метастаз из матки. A cancer metastasis inhibitor according to the present invention is characterized by containing a sugar chain separated from a surface of a Streptococcus agalactiae Ia type or Ib type as a main ingredient. А рак метастазы ингибитора в соответствии с настоящим изобретением характеризуется содержащее сахар цепи отделяется от поверхности на Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа в качестве основного ингредиента. Since the surface sugar chains of the Streptococcus agalactiae Ia type or Ib type have structures similar to surface sugar chains of the cancer cells, the former surface sugar chains adhere to E-selectin appearing in an intravascular endothelial cell, competitively inhibit the adhesion between intravascular endothelial cells and the cancer cells, and effectively prevent of the metastasis of the cancer, when the sugar chains exist in blood of a patient. С поверхности сахара цепочек из Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа аналогичных структур в поверхностные сахара цепочек из раковых клеток, бывший поверхности сахара цепей придерживаться E-selectin появляться в внутрисосудистая эндотелиальных клеток, конкурентоспособной препятствует адгезии между внутрисосудистая эндотелиального клеток и раковые клетки, а также эффективного предупреждения о метастазированием от рака, когда сахара в сети существуют в крови пациента. Ads by Google
Store Data In The Cloud
Cheap And Reliable Cloud Storage Only $4.99/Mo For Unlimited Space!
Mozy.com
Parallel Language
The latest & greatest in parallel computing. Visit our expert blog!
www.ddj.com/Go-Parallel
Camera by SpeechGear
ComingSoon: Point, shoot, translate A new use for your digital camera.
www.speechgear.com
Official MindMap Software
From the inventor of Mind Mapping Tony Buzan. Free download available
www.iMindMap.com
Tibetan Translator Course
2-Year Translator Training Program Tibetan Language in Kathmandu-Nepal
www.sakyaiba.edu.np

Inventors: Изобретатели: Iijima, Shinji (Nagoya, JP) Иидзима, Шинджи (Нагоя, Япония)
Miyake, Katsuhide (Nagoya, JP) Мияки, Katsuhide (Нагоя, Япония)
Yamamoto, Shin (Nagoya, JP) Ямамото, Шин (Нагоя, Япония)
Yoshida, Yasuko (Nagoya, JP) Есида, Yasuko (Нагоя, Япония)
Kawase, Mitsuo (Nagoya, JP) Kawase, Мицуо (Нагоя, Япония)
Plaque It! Plaque It!


Application Number: Номер: 08/894461 08/894461 Publication Date: Дата публикации: 08/17/1999 08/17/1999 Filing Date: Дата подачи заявки: 08/19/1997 08/19/1997 View Patent Images: Просмотр фотографий Патент: Images are available in PDF form when logged in. To view PDFs, Login or Create Account (Free!) Фотографии доступны в PDF форму, если войти дюйм Для просмотра PDF-файлов, Войти или создать учетную запись (бесплатно!) Export Citation: Экспорт Образец цитирования: Click for automatic bibliography generation Нажмите кнопку для автоматической генерации библиография Assignee: Assignee: NGK Insulators, Ltd. (JP) НГК изоляторы, Ltd (Япония)
Primary Class: Начальное класса: 514/54 514/54 Other Classes: Другие классы: 424/244.100, 514/23, 536/123, 536/123.100 424/244.100, 514/23, 536/123, 536/123.100 International Classes: Международных классов: A61K31/715 ; A61K35/74 ; C12P19/04 ; A61K35/66 ; C12P19/00 ; A61K31/715; C08B37/00; A61K39/09 A61K31/715; A61K35/74; C12P19/04; A61K35/66; C12P19/00; A61K31/715; C08B37/00; A61K39/09 Field of Search: Область поиска: 424/244.1, 514/54, 514/23, 536/123.1, 536/123 424/244.1, 514/54, 514/23, 536/123.1, 536/123 US Patent References: Патент США литературы: 4413057 4413057 Group B streptococcal capsular polysaccharides Группа B стрептококковый капсульные полисахариды November, 1983 Ноябрь, 1983 Carlo et al. Карло и др.. 435/101 435/101
Foreign References: Иностранные литературы: JP57175123 JP57175123 October, 1982 Октябрь, 1982 ANTITUMOR AGENT AND ITS PREPARATION ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ агента и его подготовке
JP57212122 JP57212122 December, 1982 Декабрь, 1982 ANTITUMOR AGENT AND ITS PREPARATION ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ агента и его подготовке
JP6501383 JP6501383 February, 1994 Февраль, 1994
WO/1995/019374 WO/1995/019374 July, 1995 Июль, 1995 BACTERIAL RECEPTOR STRUCTURES БАКТЕРИАЛЬНОЙ РЕЦЕПТОРОВ СТРУКТУРЫ
Other References: Другие ссылки: Cell Technology: Y. Kawamura et al. Сотовые технологии: Ю. КАВАМУРА и др.. "Adhesion between cancer cells and the endothelial cells via sugar chains", vol. "Адгезия между раковых клеток и эндотелиальных клеток с помощью сахара сети", Vol. 7, pp. 7, с. 1151-1157, No. 8, Jul. 1993. 1151-1157, № 8, июль 1993.
Primary Examiner: Начальное экзаменатор: Prats, Francisco Пратс, Франсиско Parent Case Data: Родители Дело данных: This application is a 371 of international application number PCT/JP95/02375, filed Dec. 27, 1995. Это приложение представляет собой 371 международных номер PCT/JP95/02375, подал Декабрь 27, 1995.
Claims: Требования: We claim: Мы требуем:

1. 1. A method for inhibiting metastasis of cancer cells in a patient comprising Разработан метод препятствует метастазирование раковых клеток пациента в составе
treating said patient with a metastasis-inhibiting effective amount of a sugar chain separated from the surface of a Streptococcus agalactiae of the Ia type or the Ib type. лечение сказал пациенту с метастазированием-препятствующих эффективному количества сахара цепи отделяется от поверхности на Streptococcus agalactiae из типа Ia и Ib типа.



2. 2. The method of claim 1 wherein said sugar chain is a chain separated from the surface of the Streptococcus agalactiae Ia type of the formula: ##STR1##. Метод п. 1 которой говорит сахара цепи цепи отделены от поверхности на Streptococcus agalactiae типа Ia в формуле: STR1 # # # #.

3. 3. The method of claim 1 wherein said sugar chain is a chain separated from the surface of the Streptococcus agalactiae Ib type of the formula:. Метод п. 1 которой говорит сахара цепи цепи отделены от поверхности на Streptococcus agalactiae Ib вида формуле:.

Description: Описание: TECHNICAL FIELD Технической сфере

The present invention relates to a cancer metastasis inhibitor containing a sugar chain separated from the surface of a streptococcus agalactiae Ia type or Ib type surface polysaccharide as a main ingredient. В настоящее изобретение относится к метастазирование рака ингибитор, содержащих сахар цепи отделяется от поверхности на Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа поверхности полисахаридной качестве основного ингредиента.

BACKGROUND TECHNOLOGY ИСТОРИЯ ТЕХНИКИ


As the cancer therapeutic method, a chemotherapy in which various antitumor agents are administrated, an immunotherapy in which production of an antibody to cancer cells is accelerated, a surgical therapy in which cancer cells are removed or enucleated, radiotherapy in which cancer cells are killed by irradiating radioactive rays upon them, etc. are employed. Поскольку рак терапевтического метода, а химиотерапия, в котором различные противоопухолевые препараты администрируется, в иммунотерапии, в которых производство на антитела к раку клеток ускоряется, хирургическое лечение, в котором раковые клетки удаляются или enucleated, лучевая терапия, в которой раковые клетки погибают путем облучение радиоактивными лучами на них и т.д., работают.

However, even if a primary cancer is completely healed, a problem may still exist. Однако, даже если первичный рак полностью исцелил, а проблема все еще может существовать. That is, the reason why the cancer is a malignant tumor is that the cancer is metastatic, and that persons are often killed with metastatic cancers provoked by metastasis of cancer cells. То есть, причина, по которой рак является злокачественной опухоли, что является метастатическим раком и что лица, часто убивали метастатическими рака спровоцированы метастазирование раковых клеток. It cannot be said that a method for suppressing the metastasis of the cancer cells has been established, and it is a present situation that a medicine having a cancer cell metastasis suppressing effect has not yet been made commercially available. Нельзя сказать, что метод подавления метастазирования рака из клеток была создана, и она является нынешняя ситуация, что лекарства, имеющие метастазирование раковых клеток подавление эффекта до сих пор не сделал коммерчески доступный.

On the other hand, a few or several steps are considered for the metastasis mechanism, and a casual relationship between the cancer metastasis and the sugar chain has been recently discussed in academic meetings. С другой стороны, несколько или несколько шагов являются для метастазированием механизма и случайных связей между метастазы рака и сахарного цепи недавно обсуждался в научных совещаниях. In the metastasis of the cancer cells, cancer cells are first released from a cancer-developed site, and are carried and moved through a human body with blood. В метастазированием в раковые клетки, раковые клетки сначала освободили от рака разработали сайт, а также ведутся и переехал через человеческое тело с кровью. E-selectin as one of intercellular adhesive molecules appears on the surface of an intravascular endothelial cell for a certain reason. E-selectin в качестве одного из клейких молекул межклеточной появляется на поверхности в внутрисосудистая эндотелиальных клеток для определенной причине. This E-selectin interacts with free cancer cells moving through the human body with blood, which causes a rolling phenomenon in which the free cancer cells roll on the surfaces of the intravascular endothelial cells and reduce their moving speed in the blood. Этот e-selectin взаимодействует со свободными раковых клеток движущихся через тело человека в крови, что приводит к скользящей явления, в которых бесплатно раковых клеток ролл на поверхностях из внутрисосудистая эндотелиальных клеток и снизить их скорость перемещения в крови. Consequently, the free cancer cells are adhered to the intravascular endothelial cells through the rolling phenomenon. Таким образом, свободная раковых клеток присоединилась к внутрисосудистая эндотелиальных клеток путем прокатки явление. Then, the cancer cells pass between the intravascular endothelial cells, and enter vascular tissues, so that a new cancer cell nest is formed (See FIG. 1). Затем, на раковые клетки проход между внутрисосудистая эндотелиальных клеток, а также ввести сосудистых тканей, так что новый раковых клеток гнезде образуется (см. рис. 1).

In this series of steps, the adhesion between the E-selectin, appearing as one of the intercellular adhesive molecules, on the surface of an intravascular endothelial cell and the sugar chain present at the surfaces of the cancer cells plays a very important role in an initial stage of the adhesion between the cancer cells and the intravascular endothelial cells. В этой серии шагов, сцепление между E-selectin, фигурируют в качестве одной из молекул межклеточной клей, на поверхности один внутрисосудистая эндотелиальных клеток и сахар цепи присутствующие на поверхности раковых клеток играет очень важную роль в Начальная стадия адгезии между раковых клеток и внутрисосудистая эндотелиальных клеток. As an antibody against the sugar chain at the surface of the cancer cell which sugar chain interacts with the E-selectin, sialic acid-containing complex sugar chains called sialyl Le a and sialyl Le x have been identified. Как антител против сахарного цепь на поверхности раковых клеток, которые сахар цепи взаимодействует с E-selectin, sialic кислоты, содержащие сложные цепочки сахарных призвал сиалил Le один и Le сиалил х были выявлены.

DISCLOSURE OF THE INVENTION Раскрытие изобретения


Having noted that the surface sugar chain of a Ia type or Ib type of bacteria called Streptococcus agalactia has a structure very similar to that of the sugar chain called sialyl Le a or sialyl Le x as the antibody against the sugar chain at the surface of the cancer cell (See FIG. 2), the present inventors have completed the present invention based on an idea that the metastasis of the cancer cells might be prevented by utilizing the surface sugar chain originating from the Streptococcus agalactia bacteria Ia type or Ib type. Отмечая, что поверхность сахарной цепи из типа Ia и Ib тип бактерий Streptococcus призвал agalactia имеет очень похожую структуру, что и сахар цепочке называется сиалил Le один или сиалил Le х как антитела против сахарного цепь на поверхности в раковых клеток (см. рис. 2), настоящий изобретатель завершили нынешний изобретение основано на идее о том, что метастазы в раковые клетки могут быть предотвращены путем использования поверхности сахарной цепи происходящих из бактерий Streptococcus agalactia типа Ia и Ib типа. The surface sugar chains originating from the Streptococcus agalactia bacteria Ia type and Ib type differ from the antibody against the surface sugar chain of the cancer cell only in that the sialyl Le a and sialyl Le x as the antibody against the sugar chains at the surface of the cancer cell have a fucose residue, whereas the surface sugar chains originating from the Streptococcus agalactia bacteria Ia type and Ib type have glucose and galactose polymerized as in FIG. Поверхность сахара цепи происходящих из бактерий Streptococcus agalactia типа Ia и Ib типа отличаются от антител против поверхностных сахар цепочку из раковых клеток только в том, что сиалил Le один и Le сиалил х как антитела против сахарного цепей на поверхности раковых клеток есть fucose остатков, в то время как поверхность сахарной цепи происходящих из бактерий Streptococcus agalactia типа Ia и Ib типа глюкозы и галактозы полимеризованной, как на рис. 2. 2.

More specifically, the present inventors have noted the surface sugar chains originating from the Streptococcus agalactia bacteria Ia type and Ib type, and considered if the adhesion among the above polysaccharides and the cancer cells and the intravascular endothelial cell could be competitively inhibited by utilizing the polysaccharide separated and purified from these bacteria. Более конкретно, в настоящем изобретатели отмечают поверхности сахарной цепи происходящих из бактерий Streptococcus agalactia типа Ia и Ib типа, и считает, если сцепление между выше полисахаридов и раковых клеток и эндотелиальных клеток внутрисосудистая может быть конкурентоспособным ингибируется использованием полисахаридной отстоящих друг от друга и очищенный от этих бактерий. As a result of strenuous investigations, the present inventors have accomplished the present invention. В результате напряженных исследований, в настоящем изобретатели добились настоящего изобретения.

That is, the present invention is to provide a cancer metastasis inhibitor for effectively inhibiting the metastasis of the cancer. То есть, настоящие изобретения заключается в том, чтобы обеспечить метастазирование рака ингибитор для эффективного затруднение метастазированию рака.

The cancer metastasis inhibitor according to the present invention is characterized by being composed mainly of at least any one of the surface sugar chains originating from the Streptococcus agalactia bacteria Ia type and Ib type. В метастазы рака ингибитора в соответствии с настоящим изобретением характеризуется в основном состоят из по меньшей мере одной из поверхностей сахара цепи происходящих из бактерий Streptococcus agalactia типа Ia и Ib типа.

Since the surface sugar chains originating from the Streptococcus agalactia bacteria Ia type and Ib type used in the present invention have the structures similar to that of the sugar chain at the surface of the cancer cell, such surface sugar chains adhere to E-selectin appearing at the intravascular endothelial cells when the sugar chains exist in blood, so that adhesion between the intravascular endothelial cells and the cancer cells is competitively inhibited to effectively prevent the metastasis of the cancer. Поскольку поверхность сахарной цепи происходящих из бактерий Streptococcus agalactia типа Ia и Ib типа, используемые в настоящем изобретении имеют аналогичную структуру, что и сахар цепь на поверхности раковых клеток, такие поверхностные сахара цепей придерживаться E-selectin появляться на внутрисосудистая в эндотелиальных клетках, когда сахара в сети существуют в крови, так что сцепление между внутрисосудистая эндотелиальных клеток и клеток является конкурентным препятствовали эффективно предотвращать метастазирование рака.

Further, although the polysaccharide outside the Streptococcus agalactia bacteria can exhibit cytotoxicity as it is, an oligomer obtained by decomposing the sugar chain at the surface of the above bacteria is used in the present invention. Кроме того, хотя полисахаридной вне Streptococcus agalactia бактерии могут экспонат цитотоксичность, как она есть, один олигомер получены разложения сахара цепи на поверхность из вышеупомянутых бактерий, используемых в настоящем изобретении. Accordingly, the metastasis of the cancer can be prevented with higher safety. Соответственно, метастазы рака в могут быть предотвращены с высокой безопасностью.

BRIEF DESCRIPTION OF THE INVENTION КРАТКОЕ описание изобретения


FIG. Рис. 1 is a figure for diagrammatically showing the metastasis mechanism of the cancer cells; 1 представляет собой показатель схематически с указанием механизм метастазирования раковых клеток;

FIG. Рис. 2 is a figure for illustrating the structures of the sialyl Lewis Le a , sialyl Lewis Le x and the sugar chains originating from the surfaces of the Streptococcus agalactia bacteria Ia and Ib; 2 фигуры для иллюстрации структуры в сиалил Льюис Le A, сиалил Льюис Le х и сахар цепочек из поверхностей из бактерий Streptococcus agalactia Ia и Ib;

FIG. Рис. 3 is a flow chart for illustrating a process for cultivating, purifying and identifying the surface sugar chain of the Streptococcus agalactia bacteria Ia or Ib; 3 представляет собой схему для иллюстрации процесса выращивания, очистки и определения поверхности сахарной цепи из бактерий Streptococcus agalactia Ia и Ib;

FIG. Рис. 4 shows gel filtration profiles of surface sugar chains from Streptococcus agalactiae, wherein FIGS. 4 показывает, гель фильтрации профилей поверхности сахара цепочек из Streptococcus agalactiae, в котором рис. 4(a) and 4(b) are separation profiles in gel filtration of the sugar chains originating from the surfaces of the Streptococcus agalactia bacteria Ia and Ib; 4 (а) и 4 (б) разделение профилей в гель фильтрации сахара цепочки из поверхностей из бактерий Streptococcus agalactia Ia и Ib;

FIG. Рис. 5 is a flow chart showing a confirmation test process for adhesion (inhibition); 5 схему с указанием подтверждение теста процесса сцепления (торможение);

FIG. Рис. 6 is a figure for diagrammatically illustrating that the sugar chains originating from the surfaces of the Streptococcus agalactia bacteria Ia or Ib inhibit the labeled cancer cells from adhering to the intravascular endothelial cells; 6 цифра для схематически, иллюстрирующих, что сахар цепочки из поверхностей из бактерий Streptococcus agalactia Ia и Ib препятствовать помечены раковых клеток от присоединения к внутрисосудистая эндотелиальных клеток;

FIG. Рис. 7 shows E-selection expression appearance in human, wherein FIGS. 7 показывает, E-выбор выражения человеческого вида, в котором рис. 7(a), 7(b), 7(c) and 7(d) are microphotographs showing that E-selectin was produced by interleukin 1β in cell-lined intravascular endothelial cell strain #5-1 and human normal intravascular endothelial cells; 7 (а), 7 (б), 7 (с) и 7 (г) microphotographs свидетельствующие о том, что E-selectin был подготовлен интерлейкина 1β в ячейке облицовка внутрисосудистая эндотелиальных клеток штамма # 5-1 и человеческого нормального внутрисосудистая эндотелиальных клеток;

FIG. Рис. 8 shows inhibition of adhesion between cancer cells and human intravascular endothelial cells, wherein FIGS. 8 показывает, ингибирование адгезии между раковых клеток и человеческих внутрисосудистая эндотелиальных клеток, в которых рис. 8(a), 8(b) and 8(c) are microphotographs showing an effect that E-selectin is produced by inteleukin 1β and an effect that adhesion of the cancer cells to the intravascular endothelial cells is inhibited by the surface sugar chain of Streptococcus agalactiae bacteria Ia type or Ib type; and 8 (а), 8 (б) и 8 (с) microphotographs изображения того, что E-selectin производится inteleukin 1β и в том, что прилипание раковых клеток к внутрисосудистая эндотелиальных клеток ингибируется поверхности сахара цепи Streptococcus agalactiae бактерий типа Ia и Ib типа и

FIG. Рис. 9 shows effect of surface sugar chains from Streptococcus agalactiae on cell adhesion bewteen HL-60 cells and human intravascular endothetial cells, wherein FIGS. 9 показано влияние поверхности сахар цепочек из Streptococcus agalactiae по bewteen адгезии клеток HL-60 клетках человека и внутрисосудистые endothetial клетки, в которых рис. 9(a) through 9(d) show that the adhesion between the cell-lined intravascular endothelial cell strain #5-1 or human normal intravascular endothelial cell and the cancer cells HL-60 is inhibited by the surface sugar chain of Streptococcus agalactiae bacteria Ia type or Ib type. 9 (а) до 9 (D) свидетельствуют о том, что сцепление между клеток облицовка внутрисосудистая эндотелиальных клеток штамма # 5-1 или человеческих нормальных внутрисосудистая эндотелиальных клеток и клеток HL-60 препятствует поверхности сахара цепочки бактерий Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа.

FIGS. ФПГ. 10(a)-(d) show the effect of surface sugar chains from Streptococcus agalactiae on cell adhesion between Colo 201 cells and human intravascular endothetial cells. 10 (а) - (д), свидетельствуют о том, поверхностных сахар цепочки из Streptococcus agalactiae по клеточной адгезии между Colo 201 клеток и человеческих внутрисосудистая endothetial клеток.

BEST MODE FOR PRACTICING THE INVENTION Наилучший способ для практикующих ИЗОБРЕТЕНИЯ


The sugar chain to be used in the present invention can be obtained by cultivating a strain of the Streptococcus agalactiae Ia type or Ib type, fixing the resultant, precipitating a polysaccharide in a given solvent, and then separating and purifying the resulting surface polysaccharide by a gel filtration process or like. Сахара цепочки, которые будут использоваться в данном изобретении может быть получен путем культивирования штамма о Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа, в результате фиксации, что вызовет полисахаридной в той или иной растворитель, а затем разделения и очистки поверхностей в результате полисахаридной на гель-фильтрации и как процесс.

As pharmaceutical preparations in the present invention, oral preparations such as a tablet, a capsule and powder, a percutaneous absorption preparation such as a suppository and a vaginal suppository, and injection preparations such as subcutaneous administration, intraperitoneal administration and intravenous administration may be recited. Как и фармацевтических препаратов, в настоящем изобретении, оральный препарат, например, таблетки, капсулы и порошок, а чрескожной абсорбции подготовке таких как суппозиторий и вагинальный суппозиторий, и инъекции препаратов, таких, как подкожный администрации, ВНУТРИБРЮШИННОЙ администрации и внутривенного администрации может быть читали. In the case of preventing the disease, the oral preparations are most preferred, whereas in the case of emergency, the injection preparations are most preferred. В деле профилактики заболеваний, устные препараты являются наиболее предпочтительным, поскольку в случае чрезвычайных обстоятельств, то инъекции препаратов являются наиболее предпочтительным.

Although the oral preparations, a percutaneous absorption preparation and injection preparations can be formulated according to ordinary processes. Несмотря на то, что устные препаратов, а чрескожной абсорбции подготовке и инъекции препаратов могут быть сформулированы в соответствии с обычными процессами. The oral preparation and the injection preparation may be recited as follows: Устная подготовка и инъекции препарата может прочитал следующее:

(1) Formulation of an injection preparation: Into 1000 ml of distilled water (pyrogen free) was dissolved 50 g of sialic acid or its polymer, the resulting solution is adjusted to pH 7.0 with a caustic solution, filtered and according to common processes, and aseptically sealed into a 20-ml ampoule as an injection preparation. (1) Формулировка инъекции подготовки: в 1000 мл дистиллированной воды (pyrogen бесплатно) был распущен 50 г sialic кислоту или ее полимером, в результате этого решения корректируется с рН 7.0 с каустического раствора, фильтруются в соответствии с общими процессами, и aseptically опечатаны в 20-мл ампуле для инъекций в качестве подготовки.

(2) Formulation of an oral preparation: A capsule preparation was formed by packing 280 mg of sialic acid or its polymer having passed a 60-mesh sieve into a No. 3 gelatine capsule. (2) разработка устный подготовки: капсулы подготовка была образована в упаковке 280 мг sialic кислоту или ее полимером пройдя 60-отверстия сита в № 3 желатиновые капсулы.

The dosage varies depending upon age, sex, degree of disease, etc. of the patient, and therefore cannot be generally specified. Дозировка колеблется в зависимости от возраста, пола, степени заболевания и т.д. пациента и, следовательно, не может быть указан в целом. However, an adult may be administrated with 1 to 2000 mg/Kg, preferably 10 to 500 mg/Kg per day when calculated in the form of a sodium salt of sialic acid or its polymer contained in the injection preparation. Тем не менее, для взрослых может быть управляются с 1 до 2000 мг / кг, предпочтительно от 10 до 500 мг / кг в день, когда рассчитывается в виде натриевой соли один из sialic кислоту или ее полимер, содержащийся в инъекций подготовки. The number of times of administrations is appropriately 1 to 6, and intravenous drip infusion administration is effective measure. В несколько раз администраций надлежащим 1 до 6, а капельное внутривенное вливание администрации является эффективной мерой.

In the following, the cancer metastasis inhibitor according to the present invention which comprises the surface polysuccharide(s) of the Streptococcus agalactiae Ia type and/or Ib type will be explained in more detail with reference to the drawings. В следующем году метастазы рака ингибитора в соответствии с настоящим изобретением, которая состоит из поверхности polysuccharide (ы) о Streptococcus agalactiae Ia типа и / или типа Ib будут разъяснены более подробно со ссылкой на чертежи. (Separation and purification of the surface polysaccharide(s) of Streptococcus agalactiae Ia type and/or Ib type) (Выделение и очистку поверхности полисахаридной (ы) Streptococcus agalactiae Ia типа и / или типа Ib)

(1) First, each of the strains of the Streptococcus agalactiae Ia type and Ib type are fermented and cultivated for 24 hours in a brain-heart infusion-broth culture, and fixed with a 2 wt % aqueous formalin solution, and a polysaccharide cultivated on the surface of the strain was separated from the strain. (1) Во-первых, каждая из штаммов из Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа ферментированные и культивируются в течение 24 часов в мозг-сердце-инфузия бульон культуры, а с фиксированной 2 мас% формалина водный раствор, а полисахаридной культивируемых на поверхности штамм был отделен от штамма. The cultivated mixture was subjected to centrifugal separation at 5000 rpm for 20 minutes, and the polysaccharide was precipitated by adding an 80% ethanol aqueous solution to a supernatant thereof. Обрабатываемой смеси был подвергнут центробежной разделительной на 5000 об / мин в течение 20 минут, а полисахаридной было вызвано добавлением 80% водного раствора этанола в супернатанта его. The surface polysaccharide was separated and coarsely purified. Поверхность полисахаридной отделили и грубо очищенный. Next, the thus obtained polysaccharide was fractioned depending upon the molecular weight by a gel filtration process. Далее, таким образом, была получена полисахаридной fractioned в зависимости от молекулярной массы на гель процесс фильтрации. A specific polysaccharide was identified according to an ELISA process by using a specific antiserum of the Streptococcus agalactiae Ia type or Ib type produced by rabbit. Конкретный полисахаридной была определена в соответствии с ELISA процесс с помощью конкретных сыворотка из Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа произведенных на кролика.

(2) Another embodiment of the above process will be shown in more detail by a flow chart in FIG. (2) Еще одно воплощение указанных выше процесс будет показано более подробно по схеме на рис. 3. 3.

(3) FIGS. (3) ФПГ. 4(a) and 4(b) show fractionating profiles when the surface polysaccharides of the strains of the Streptococcus agalactiae Ia type and Ib type were identified by the ELISA process in the gel filtration of their sugar chains, respectively. 4 (а) и 4 (б) показать фракционирования профилей, когда поверхность полисахаридов из штаммов о Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа были выявлены в ИФА процесса в гель фильтрации их сахарной цепи, соответственно. In each figure, an abscissa gives the fraction number, and an ordinate gives the concentration of the fractionated sugar chain and the absorbance of each fraction at 490 nm ("o" shows the concentration of the sugar chain, and "x" shows the absorbance at 490 nm). В каждом рисунке, один абсцисс дает фракция числа, а ордината дает концентрацию сахара в фракционированной цепи и поглощения каждого фракция на 490 нм ( "O" показывает концентрацию сахара цепи, и "х" показывает поглощения при 490 нм). In this Example, gel filtration was effected by using Sepharose 4B filled in a column, 1.5 cm in diameter and 90 cm in height. В этом примере, гель-фильтрации было осуществлено с помощью Sepharose 4B заполненные колонки, 1,5 см в диаметре и 90 см в высоту. As both a carrier solvent and an eluting liquid, a 50 mM tris-hydrochloric acid buffer (pH 7.4) was used. Как перевозчик растворителя и eluting жидкость, 50 мМ трис-соляной кислотой буфером (рН 7.4) были использованы.

It is seen that with respect to each of the surface polysaccharides of the strains of the Streptococcus agalactiae Ia type and Ib, the specific sugar chain was eluted in a larger molecular weight fraction side. Видно, что в отношении каждого из поверхностных полисахаридов из штаммов из Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib, особый сахар цепочка была eluted в большей молекулярной массой фракция стороне.

(4) Next, how much adhesion of the cancer cell to the intravascular endothelial cells thus cultivated was inhibited by the addition of the sugar chain obtained above to the intravascular endothelial cells was examined. (4) Далее, сколько адгезии раковых клеток к внутрисосудистая эндотелиальных клеток, таким образом, была культивируемая ингибируется добавлением сахара цепочки получили выше, внутрисосудистая эндотелиальных клеток был рассмотрен. See FIG. См. рис. 5. 5. First, intravascular endothelial cells were placed on one plane of a 96-well plate, and appearance of E-selectin was induced by adding interleukin-1β to the cells. Во-первых, внутрисосудистая эндотелиальные клетки были помещены в одну плоскость а также 96-пластины и появление E-selectin индуцировали добавив интерлейкин-1β к клеткам. The cultivation for about 3 hours made E-selectin appear. Выращивание в течение примерно 3 часа выступил E-selectin появятся. The Ia type or Ib type sugar chain was added to it, and 1×10 4 cancer cells labeled with 35 S! На типа Ia и Ib типа сахара цепочке был добавлен к нему, и 1 × 10 4 клеток с символикой 35 S! methionine were added to it, and the mixture was left at 37° C. for 30 minutes as it was. метионин были добавлены к нему, а также смеси был оставлен при 37 ° C. течение 30 минут, как это было. Thereafter, the mixture was immersed in and washed with PBS, and those cancer cells not adhered were washed off. После этого смесь погружается и промыть PBS, а те раковые клетки, не соблюдались были смыты. The cells were recovered by adding 100 μl of a 0.1 N aqueous solution of sodium hydroxide to each of the 96-well plates, and a residual radioactivity value was measured by using a liquid scintillation counter. В камерах были обнаружены путем добавления 100 мкл 0,1 N водного раствора гидроксида натрия в каждом из 96 колодцев плиты, а остаточная стоимость радиоактивность была измерена с помощью жидкого сцинтилляционного счетчика. See FIG. См. рис. 5. 5. FIG. Рис. 6 shows that the cells labeled with 35 S methionin are adhered to the intravascular endothelial cells and that such adhesion is inhibited by the above sugar chains. 6 показано, что клетки с символикой 35 S метионина являются присоединилась к внутрисосудистая эндотелиальных клеток и что такое сцепление ингибируется на сахар выше цепочки.

FIGS. ФПГ. 7(a) through 7(d) are microphotographs obtained by photographing with a fluorescent microscope to confirm whether E-selectin was produced or not at the surfaces of the intravascular endothelial cells, through coloring the human normal intravascular endothelial cells and the cell-lined human intravascular endothelial cell strains #5 with E-selectin antibody. 7 (а) до 7 (г) microphotographs полученные фотографированием с флуоресцентного микроскопа для подтверждения того, E-selectin была или нет на поверхности в внутрисосудистая эндотелиальных клеток, посредством раскраски человека нормальный внутрисосудистая эндотелиальных клеток и клеток облицовка Права внутрисосудистая эндотелиальных клеток штамма # 5 E-selectin антител. As compared with cases in which no interleukin-1β was added (FIGS. 7(c) and 7(d)), it is clear that appearance of E-selectin was induced in cases where interleukin-1β was added (FIGS. 7(a) and 7(b)). По сравнению со случаями, в которых не интерлейкин-1β была добавлена (рис. 7 (с) и 7 (D)), совершенно очевидно, что появление E-selectin индуцировали в тех случаях, когда интерлейкин-1β была добавлена (рис. 7 ( а) и 7 (б)).

(6) FIGS. (6) рис. 8(a) through 8(c) are microphotographs showing a state in which the cancer cells are actually adhered to the intravascular endothelial cells. 8 (а) по 8 (с) microphotographs указанием состояние, при котором раковые клетки фактически присоединилась к внутрисосудистая эндотелиальных клеток. Slender, large cells are intravascular endothelial cells, and whitish, bright, round cells are cancer cells HL-60. Slender, большие клетки внутрисосудистая эндотелиальных клеток, а белесоватый, яркие, круглые клетки раковых клеток HL-60. As is seen from FIGS. Как видно из рис. 8(a) to 8(c), as compared with a case where no interleukin-1β was added (FIG. 8a), adhesion of the cancer cells to the intravascular endothelial cells is more conspicuous in a case where interleukin-1β was added (FIG. 8b). 8 (а) до 8 (с) по сравнению со случаем, когда не интерлейкин-1β была добавлена (Рис. 8A), адгезии раковых клеток к внутрисосудистая эндотелиальных клеток является более заметным в случае, когда интерлейкин-1β была добавлена (Рис. 8b). In addition, it is seen that when the surface polysaccharide of the strain of the Streptococcus agalactiae Ia type or Ib type was further added to the interleukin-1β added case (FIG. 8(c)), the adhesion of the cancer cells to the intravascular endothelial cells are conspicuously inhibited. Кроме того, видно, что когда поверхность полисахарид из штамма о Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа был также добавлен в интерлейкин-1β добавил случае (рис. 8 (с)), адгезии раковых клеток к внутрисосудистая эндотелиальных клеток явно препятствовали.

(7) FIGS. (7) рис. 9(a) and 9(b) show that the adhesion between the cell-lined intravascular endothelial cell strain #5-1 and the cancer cells HL-60 is inhibited by the surface sugar chain of the strain of the Streptococcus agalactiae Ia type or Ib type strain. 9 (а) и 9 (б) свидетельствуют о том, что сцепление между клеток облицовка внутрисосудистая эндотелиальных клеток штамма # 5-1, и раковых клеток HL-60 препятствует поверхности сахара цепи напряжение на Streptococcus agalactiae типа Ia или Ib тип штамма. In FIGS. На рис. 9(a) through 9(d), a case where no interleukin-1β was added with no sugar chain is taken as 100%. 9 (а) до 9 (D), один случай, когда не интерлейкин-1β была добавлена не сахар цепи берется за 100%. It is seen that the adhesion of the cancer cells is inhibited by the addition of each of the surface sugar chains of the Ia type and Ib type strains, the sugar chain before the gel filtration (indicated "mixture") and the sugar chain fraction gel filtered and recognized to have the ELISA activity. Видно, что адгезии раковых клеток ингибируется добавлением каждой поверхности сахара из цепочек типа Ia и Ib типа штаммы, сахарной цепи перед гель фильтрации (указывается "смесь") и сахарной цепи фракция гель фильтрованных и признанных иметь ELISA деятельности. It is seen that the adhesion of the cancer cells is conspicuously inhibited by 100 μg/ml of the coarsely purified polysaccharide or by 10 μg/ml of the polysaccharide purified through the gel filtration. Видно, что адгезии раковых клеток явно сдерживается 100 мкг / мл в грубо очищенный полисахарид или 10 мкг / мл в очищенный полисахарид путем гель-фильтрации.

In order to confirm that the adhesion of the cancer cells by the sugar chain may not be physically inhibited, the above experimental systems were also observed provided that colominic acid as a polymer of sialic acid was added thereto. В целях подтверждения того, что сцепление раковых клеток сахарной цепи не может быть физически препятствовали, вышеуказанные экспериментальных систем было также отмечено, что colominic кислота как полимер sialic кислота была добавлена к нему. As a result, the adhesion inhibiting activity was not almost exhibited by colominic acid as a polysaccharide at such a concentration that the sugar chain originating from the surface of the strain of the Streptococcus agalactiae Ia type or Ib type exhibited the adhesion inhibiting activity. В результате этого присоединения подавляя активность была почти не проявленной colominic кислоты в качестве полисахарида на такой концентрации, что сахар цепь происходящих с поверхности штамма из Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа выставлены адгезии подавляя активность. Therefore, it was clarified that the inhibition activity exhibited by the sugar chains of the Streptococcus agalactiae Ia type and Ib type is attributable to their specific structures. Таким образом, он уточнил, что ингибирование активности, проявляемой в сахарной цепочек из Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа обусловлен их конкретными структурами.

FIGS. ФПГ. 9(c) and 9(d) give results showing that the adhesion between the human normal intravascular endothelial cells and the cancer cells HL-60 was inhibited by the polysaccharides of the Streptococcus agalactiae Ia type and Ib type. 9 (с) и 9 (д) дают результаты, показывающие, что сцепление между человеком нормальным внутрисосудистая эндотелиальных клеток и клеток HL-60 было законсервировано в полисахаридов из Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа. It is seen that the same results as those obtained with respect to the cell-lined intravascular endothelial cell strain #5-1 were obtained. Видно, что те же результаты, как те, которые получены по отношению к клетке облицовка внутрисосудистая эндотелиальных клеток штамма # 5-1 были получены.

(8) Acute toxicity test (8) Острая токсичность тест

Determination of LD50 in the intraveneous administration with use of Wister series rats (male) revealed that LD50 values of the Streptococcus agalactiae Ia type and Ib type were both not less than 2,000 mg/Kg. Определение LD50 в intraveneous администрации с использованием Wister серия крыс (мужчины) показало, что LD50 значений для Streptococcus agalactiae типа Ia и Ib типа являются не менее 2000 мг / кг.
http://translate.google.com/translate?hl=ru&sl=en&u=http://www.freepatentsonline.com/5939404.html&ei=E5H8SfueEc2Mtgeu_IWjDQ&sa=X&oi=translate&resnum=1&ct=result&prev=/search%3Fq%3DCancer%2B%2BStreptococcus%26hl%3Dru