Эффективная стратегия дендритных клеток основе Иммунотерапия повышения опухолями Посетителей: критическая роль Th1-доминирующей иммунитет 1
Kohjiro машино, Нориаки Sadanaga, Фумиаки Танака, Мицухико Охта, Хироси Ямагучи и Масаки Мори2
+ Членство автора

Кафедра хирургии, Медицинский институт биорегуляции, Университет Кюсю, Беппу 874-0838, Япония
Следующий разделАннотация
Хотя дендритных клеток (ДК)-основанной рак-специфической иммунотерапии является мощным стратегии для различных типов рака, несколько клинических исследований дали оптимального эффекта противоопухолевых. Системный иммунодефицита наблюдается у пациентов с раковыми заболеваниями. В данной работе мы исследовали способность индуцировать противоопухолевый иммунитет культурных моноцитарных РС от хостов с передовыми злокачественных опухолей, используя мышь модели. Мы нашли замечательную дисфункции ДК от мышей с раком, на которой экспонировались Т-хелперов (Th) 2-доминирующей иммунитет, и последующее снижение противоопухолевого иммунного ответа. С другой стороны, мы обнаружили, драматические восстановление способности ДК, чтобы побудить оптимального противоопухолевого иммунного ответа после системного введения стрептококковой подготовки ОК-432 к опухоли мышей, которые побудили Th1-доминирующей иммунитета. В терапевтических экспериментов, внутриопухолевые инъекции незрелых РС с ОК-432-обработанных мышей, назначенных ОК-РС, усилении торможения роста опухоли по сравнению с инъекциями незрелых РС от мышей с передовыми злокачественных новообразований, обозначение Т-РС (P <0,05), приводит к значительному удлинению общей выживаемости (Р <0,05). В анализе поверхностных антигенов клетки, антиген-представляющих возможности и интерлейкина 12 производства, мы показали, функциональных перекосов в T-РС и значительных реставраций в ОК-DC. Подробнее CD8+ опухоли проникают лимфоциты были обнаружены в мышей с ОК-РС, кроме того, CTL анализы показали, что инъекции внутриопухолевые ОК-индуцированной опухоли РС-специфический иммунный ответ на селезенке так велика, как у N-DC. Эти результаты показали, что Th1-доминирующей иммунитета могут играть важную роль в дифференциации ДК и ОК-432 может быть полезным для стимулирования оптимального эффекта противоопухолевых в округ Колумбия, иммунотерапии в опухолевых узлов.

Предыдущий разделСледующий разделВведение
CD8+ Т-клетки являются важным руку эффекторных в противоопухолевого иммунитета, и РС3 являются профессиональными антиген-представляющих клеток, что может вызвать эффективной клеточного ответа Т. В индукции противоопухолевого иммунного ответа, РС играть центральную роль многоступенчатой в том числе: () захвата и обработки опухолевых антигенов; (б) иммиграция в регионарные лимфатические узлы, и (с) представление антигенов и индукции антиген-специфические Т-клетки (1). В этой связи, использование РС в качестве бустера противоопухолевого ответа была рассмотрена перспективная стратегия для рака иммунотерапия (2, 3). В ряде докладов описали успеха в стимулировании опухоли специфический иммунный ответ после стимуляции опухолевый антиген-импульсной РС в пробирке и в естественных условиях (4). Мы и другие сообщили, что опухоль-специфической иммунотерапии использованием DC таргетинга для опухолевых антигенов индуцированных эффективного противоопухолевого иммунного ответа у пациентов со злокачественными заболеваниями (5-7). Тем не менее, очевидный успех у мышей контрастирует с текущее состояние клинической практике, в которой только меньшинство пациентов до сих пор выгоду от постоянного тока основе противоопухолевой вакцинации. Одной из причин для этого оказалось иммунной дисфункции у пациентов со злокачественными заболеваниями. В последние годы в ряде исследований сообщалось о ненадлежащей работой ДК в опухоли мышей, и у онкологических больных с поздних стадий болезни (8-10). Основные выводы этих исследований были низкая экспрессия клеточных поверхностных антигенов таких как MHC класса II, CD80, CD86 и в РС, полученных из опухолевых узлов. Это может быть одной из ключевых проблем в устранении иммунной недостаточности у больных раком. Таким образом, успех в иммунотерапии рака требует преодоления иммуносупрессии в опухолевых хостов и вызывая оптимальный иммунный ответ на опухоль.

ОК-432 является пенициллин инактивированной и лиофилизированный препарат с низким уровнем вирулентности деформации Су pyogenes Streptococcus. Это биологические модификаторы ответа и применяется в отношении различных видов рака, потому что его эффективность в повышении противоопухолевого иммунного ответа (11). Клинически она была использована особенно в Японии, как адъювантной терапии для онкологических больных (12, 13). Сообщалось, что ОК-432 увеличивает активность нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов и NK клеток и вызывает несколько цитокинов (14, 15). ОК-432 был недавно сообщила быть мощным индуктором ИЛ-12 и Th1-доминантное состояние, которое впоследствии индуцированного ИФН-γ производства в мышиной модели (16). Кроме того, ряд исследований показал, что Th1-тип цитокинов повышения терапевтической эффективности противоопухолевых ответы и что Th1-доминирующей иммунитета превосходит Th2-доминирующей иммунитета в индукции противоопухолевого иммунитета (17).

В этом исследовании мы показали, нарушение противоопухолевого иммунного ответа индуцированных РС производным от доноров с расширенными злокачественной опухоли выставке Th2-доминирующей иммунитета. Мы также показали улучшение противоопухолевого иммунного ответа вызванные РС, вытекающих из этих хостов, которые получили системное введение ОК-432, на которой экспонировались Th1-доминирующей иммунитета.

Предыдущий разделСледующий разделМатериалы и методы
Мыши.
Женский BALB / C (H-2D) и C57BL / 6 (H-2б) мышей, 5-8 недель, были приобретены у SLC (Сидзуока, Япония) и используется для всех экспериментов в возрасте 8-11 недель. Все животные были приспособиться, по крайней мере за 1 неделю до начала экспериментов.

Клеточных линий.
Colon26 мышиных толстой кишки аденокарциномы, BALB / C сингенных, была предоставлена сотовых Ресурсный центр для биомедицинских исследований (Института развития, старения и рака, Университет Тохоку, Сендай, Япония). Colon26 клон 20 (Colon26-20), сублинии из Colon26, было любезно предоставлено Nippon Roche Научно-исследовательский центр, Камакура, Япония (18). Эти клеточные линии были сохранены в RPMI 1640 с добавлением 10% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки, 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина, 2 мм глутамин, и 50 μм 2-меркаптоэтанола (Вако, Осака, Япония) .

Биологические модификаторы ответа.
ОК-432 (Picibanil; любезно предоставлены Chugai Pharmaceutical Co, Токио, Япония), лиофилизированный препарат из группы стрептококков, тип 3, Су деформации, инактивированной пенициллином G. концентрации ОК-432 выражается единиц назначен в КЕ (клиническая единица). Один К. ОК-432 равна 0,1 мг сухого стрептококков.

Подготовка домена.
Моноцитарных РС были получены, как описано ранее (19). Короче говоря, периферической крови был выделен из мышей сердечной прокол и разводят в HBSS содержащие гепарин. мононуклеаров периферийных были изолированы от градиентного центрифугирования (Lympholyte M; Sanbio, Uden, Нидерланды), и загрязнение лимфоциты были исчерпаны смесью анти-B220 (RA3-6B2), анти-CD4 (GK1.5), анти-CD8 моноклональных антител (53.6.72; RA3-6B2 и GK1.5, любезно предоставленный Отдел иммунологии, медицинский институт биорегуляции, Университет Кюсю, Фукуока, Япония, и 53.6.72, из Pharmingen, Сан-Диего, Калифорния) и кролика дополнения (Сидарлейн Laboratories Limited, Хорнби, Онтарио, Канада). Полученные клетки ресуспендировали в СМ, состоящий из RPMI 1640 году, с добавлением 10% FCS и 50 μм 2-меркаптоэтанола и подвергается до 24 ч соблюдение при 37 ° С в 6-луночных планшетах в 107 клеток / лунку. Nonadherent клетки были удалены обширные мыть, и прилипшие клетки культивировали в CM содержащий рекомбинантный гранулоцитарный мышиных / макрофаг-колониестимулирующий фактор (1000 ед / мл) и rmIL-4 (1000 ед / мл; как с Pepro Tech EC, Лондон, Соединенное Королевство). Через 8 дней культуры, nonadherent клетки были получены в РС, и большинство из этих клеток выставлены типичные дендритные морфологии и высокая экспрессия CD11c, дендритных клеток-удельной поверхности маркер, по проточной цитометрии анализа (чистота,> 80%).

Опухолями и ОК-432-рассматриваются модели.
Colon26-20 клетки (1 × 106) были привиты подкожно в фланге BALB / C мышей. Когда эти опухоли достигает 20 мм в диаметре, с опухолями мышей были принесены в жертву для подготовки ДК, полученных из опухолей мышей, называется T-DC. В ОК-432-рассматриваются модели, ОК-432 (1 KE / тела) вводили IP через день после прививки Colon26-20. При опухоли достигает 20 мм в диаметре, эти мыши были принесены в жертву для подготовки ДК производным от опухолями мышей с ОК-432, названный ОК-DC. Для контроля исследования, нормальных мышей были принесены в жертву, и контроллеры домена были получены в тех же условиях, как T-ДК и ОК-РС, и называется N-DC.

Анализ внутриклеточного синтеза цитокинов.
Для обнаружения внутриклеточных синтез цитокинов методом проточной цитометрии, мы использовали методы сообщалось ранее (20). Короче говоря, клетки селезенки были получены из жертву мышей, взвешенных в питательной среде в 106/ мл, и стимулировали 2 мкг / мл SEB (Sigma Chemical Co, Сент-Луис, Миссури), 100 МЕ / мл rmIL-2 (PeproTech ЕС LTD), и 100 МЕ / мл rmIL-4. После 6 дней культуры SEB, собранных клеток были restimulated с 5 нг / мл форболового 12-миристат 13-ацетата (Sigma), и 1 мкг / мл иономицина (Sigma) в присутствии GolgiStop (Pharmingen) в соответствии с производителя протокола (Cytofix / Cytoperm Плюс Cytostain комплект; Pharmingen). Для окрашивания, мы использовали набор из Pharmingen и последовал рекомендовал протокола. Следующие моноклональных антител были использованы: FITC-сопряженных анти-mIFN-γ, PE-сопряженных анти-MIL-4, PerCP-сопряженных анти-CD4, и соответствующие меры контроля изотипных (Pharmingen). Десять тысяч клетки были собраны для каждого образца с помощью FACScan, и данные, полученные были проанализированы с CellQuest программного обеспечения (Becton Dickinson).

Анализ молекул клеточной поверхности.
Для анализа фенотипических ДК, ПЭ-сопряженных моноклональных антител против мышиных клеточной поверхности молекул (CD80, CD86, CD40, класс I, класс II, и соответствующие меры контроля изотипных, все из Pharmingen, Сан-Диего, Калифорния) были использованы, и цитометрический анализ был проведен использованием FACScan (Becton Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния). FITC-сопряженных анти-CD11c МАБ (Pharmingen) был использован для ворот на CD11c яркие населения РС. Десять тысяч клетки были собраны для каждого образца, и данные, полученные были проанализированы с программным обеспечением CellQuest. Fc рецепторы были заблокированы по борьбе с Fc рецептор антител (2.4G2, любезно предоставленный Отдел иммунологии, медицинский институт биорегуляции, Университет Кюсю, Фукуока, Япония) до окрашивания молекул клеточной поверхности.

Эндоцитоза анализа.
Зависящий от температуры поглощение FITC-меченого декстран был использован для измерения эндоцитозного функции в соответствии с изменением процедуры, описанной ранее (21). Свежий домена было приостановлено в 0,5 мл CM и культурной с FITC-меченого декстрана (Sigma) в течение 60 мин при любом 0 ° С или 37 ° C. Клетки, экспрессирующие CD11c окрашивали, добавив анти-CD11c-PE в течение последних 5 мин анализ; Реакцию останавливали добавлением ледяной PBS, содержащего 0,1% азида. Окрашенных клеток промывали три раза, и CD11c+ населения была проанализирована сразу для внутриклеточного накопления этикетке FITC по цитометрический анализа. Степень эндоцитоза была определена путем сравнения внутриклеточного поглощения при 37 ° C с неспецифического связывания, которые имели место при 0 ° C.

MLR.
MLR была проведена coculturing C57BL / 6 клеток селезенки мышей (5 × 106) в качестве ответчика клетки с различным числом митомицин С (Kyowa Hakko ООО, Осака, Япония)-лечение, BALB / C-производных РС в качестве эффекторных клеток. После 5 дней coculture, распространения ответчиком клетки оценивали по пролиферации клеток ИФА BrdUrd (Roche Diagnostics, Мангейм, Германия) в соответствии с рекомендациями производителя протокола (22).

Продукции цитокинов анализа.
Сыворотка была собрана, когда мыши были принесены в жертву для получения периферической крови. Сыворотка уровни цитокинов (IL-4, IL-6, IFN-γ и TNF-α) были измерены с помощью мыши наборы ELISA (BioSource, Камарильо, CA). Для исследования IL-12 производства, собранных РС (5 × 106/ мл) ресуспендировали в CM содержащие CD40L (5 мкг / мл; Pharmingen) и культивировали в течение 72 ч. Супернатантах культуры были собраны, и количество выделяемых Ил-12 (p40/p70) определяли методом ИФА (COSMO био, Токио, Япония). Этот набор ИФА может обнаруживать как p70 IL-12 и p40 IL-12.

Модели лечения опухолей.
Мыши, как правило, привитых внутрикожно в бритая флангов на двусторонней основе с 5 × 105 Colon26 клетки в день 0. На 5-й день, когда размер опухоли составил около 20-40 мм3, 1 × 107 РС (N-РС, Т-РС, и ОК-DC) приостановлены в HBSS вводили в левый фланг интратуморально. На день 7, 1 × 107 РС вводили в левой опухоли снова. Рост опухоли контролировали каждый день путем измерения двух перпендикулярных диаметров опухоли и опухоли высота с суппортами. Для сравнения с групповой терапии, округ Колумбия, мышей nontherapy группы вводили HBSS.

Иммуногистохимия.
Опухоли резекции на 7-й день после лечения РС и было вложено в октябре соединения (ткани Tek; Сакура Finetechnical, Токио, Япония) и замораживали в жидком азоте. Криостат разделы 6-мкм были оттепели монтажа на слайдах, высушенный на воздухе, и хранить высушенных при -20 ° C. Разделы были зафиксированы в течение 15 минут в холодной ацетон, гидратированные в PBS, и инкубировали в белок-блокирующим раствором (Блок Ace; Dainihon Seiyaku, Осака, Япония) в течение 30 мин. Эндогенная активность пероксидазы была заблокирована с 0,3% H2O2 в метаноле. Для обнаружения мышиных CD8+ Т-клеток, срезы инкубировали в течение 1 ч с анти-CD8α МАБ (53.6.72; Pharmingen). После того, промывали в PBS, они инкубировали с биотин-меченых antirat IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA) и затем подвергают обработке авидин-биотин-пероксидазы комплексного использования DAKO LSAB пероксидазы комплект (DAKO, Карпинтерия, Калифорния). Цветной реакции была разработана в 3,3 '-диаминобензидина решение, и counterstaining была выполнена гематоксилином решение Майера.

CTL анализов.
Спленоциты было собрано от двух мышей / группа 7 дней после инъекции внутриопухолевые с РС. Эти клетки (2 × 106) были restimulated в пробирке с 2 × 105 митомицин C-клетки, обработанные Colon26 в присутствии rmIL-2 (25 МЕ / мл). Пять дней спустя, restimulated клетки были использованы в качестве эффекторов для стандартной 4-х 51Cr релиз анализа против Colon26, МЦ-1, и методологиям, сингенных опухолевых клеток. Короче говоря, клетки-мишени (1 × 106 каждого) были помечены с 100 мкКи Na2 51CrO4 в течение 1 ч. После мытья в два раза, эти эффекторные и клетки-мишени были помещены в соответствующие E: T соотношение в 96-а, с круглым дном вкус. Супернатант (100 мкл) была собрана после 4-часовой инкубации, и радиоактивность рассчитывали в гамма-счетчика. Процент конкретных лизис рассчитывается по следующей формуле:% конкретные лизиса = 100 × (экспериментальный релиз - спонтанное выделение) / (максимальный выпуск - спонтанное выделение).

Статистического анализа.
Достоверность различий между группами была проанализирована с помощью T испытания и повторных измерений ANOVA. Выживание анализ был проведен с тест-Мейера Каплан. Уровень значимости был установлен на уровне P <0,05.

Предыдущий разделСледующий разделРезультаты
Colon26-20 Индуцированные Потеря веса и Th2-господствующее государство в мышей-опухоленосителей.
Для выяснения характеристик Colon26-20-мышей, мы впервые оценил способность опухоли, чтобы вызвать отклонения, связанные с потерей веса и уровня цитокинов сыворотки. рис. 1 показывает, туши веса и уровня сывороточных цитокинов (IFN-γ, TNF-α, IL-4 и IL-6) определяется, когда мыши были принесены в жертву для получения домена. Colon26-20 индуцированных значительная потеря веса (P <0,01) и значительное повышение сывороточного Th2 цитокинов типа, таких как IL-4 и IL-6 (Р <0,01, P <0,001, соответственно) в опухоли мышей, по сравнению с нормальными мышами.

Системное введение ОК-432 Индуцированные Th1-господствующее государство в Colon26-20 мышей-опухоленосителей.
В ОК-432-лечение опухоли мышей, значительно высокий уровень IFN-γ наблюдалось (Р <0,001), а высота Th2-тип цитокинов, таких как IL-4 и IL-6, были подавлены (P <0,01 и Р <0,05, соответственно; . рис. 1, B, C, и D) Для оценки системного иммунитета у нормальных мышей, мышей-опухоленосителей, и ОК-432-лечение опухоли мышей, спленоцитов были получены от каждого группы, и внутриклеточного синтеза цитокинов из CD4+ Т-лимфоцитов определяли методом проточной цитометрии анализа (рис. 1Г). Т-клетки активируются и окрашивали PerCP-сопряженных, анти-CD4; FITC-сопряженных, анти-IFN-γ, и PE-сопряженных, анти-IL-4 антител. CD4+ клетки из опухоли мышей, были окрашены в IL-4 (Th2-тип цитокинов)-доминирующее насытить (IFN-γ: IL-4 отношения, 0,5), тогда как CD4+ клетки из нормальной и ОК-432-лечение опухоли мышей, были окрашены в IFN-γ (Th1-тип цитокинов)-доминантное состояние (IFN-γ: IL-4 отношения, 5,0 и 6,2, соответственно).

Фенотипические различия трех различных DC подмножества (N-РС, Т-РС, и ОК-DC).
РС из трех групп (нормальный хостов, с опухолями Саваоф, и ОК-432-лечение опухолевых узлов) были получены на 8 дней культуры в тех же условиях, как описано в разделе "Материалы и методы". РС, вытекающих из этих групп были назначены N-РС, Т-РС, и ОК-РС, соответственно. Для изучения экспрессии поверхностных антигенов ячейки, эти три домена были рассмотрены проточной цитометрии анализа. Рис. 2 показывает, MCF интенсивности каждого антигена. Значительно низкой экспрессии класса II, CD80, CD86 и был обнаружен в T-РС по сравнению с N-РС, тогда как в ОК-РС, значительно высоким уровнем экспрессии класса II и CD80 было обнаружено, что указывает на клеточной поверхности антиген выражения типа ОК- РС были почти равные с N-DC. Все эти клетки могут быть рассмотрены незрелые ДК, потому что они морфологические особенности незрелых ДК, высокий уровень экспрессии CD11c и низкий уровень экспрессии CD40.

Функциональные различия трех различных DC подмножества (N-РС, Т-РС, и ОК-DC).
Для индукции терапевтического противоопухолевого иммунитета, это первый важный шаг для РС, чтобы захватить опухолевых антигенов. Для оценки способности endocytose из трех подмножеств DC, мы провели эндоцитоза методом с использованием проточной цитометрии. Как показано на рис. 3, высокой интенсивности флуоресценции наблюдаются во всех подмножеств, и не было никаких существенных различий между ними. Эти результаты показали, что нет никакой разницы в возможность захвата антигенов, и результаты также поддерживается, что все подмножества DC принадлежат незрелые ДК. Для сравнения презентации антигена свойств ДК, мы следующем осуществляется аллогенных MLR. Использование C57BL / 6 спленоцитов мыши (5 × 106) в качестве ответчика клетки, MLR проводили coculturing таких клеток с различным числом митомицин C-лечение РС производным от каждой группы BALB / C мышей. Пролиферации клеток из респондентов оценивали по BrdUrd поглощения с помощью ИФА. По сравнению с Т-РС, как N-ДК и ОК-РС было заметно увеличилась способность генерировать MLR с аллогенной C57BL / 6 ответчика лимфоцитов (рис. 3Б). IL-12 играет ключевую роль в индукции противоопухолевого ответа включая активацию Т-клеток и натуральных киллеров (23). Для определения возможности три подмножества DC для производства Ил-12, РС стимулировали CD40L в течение 72 ч, и Ил-12 выделяется в супернатантов была количественно цитокинов конкретных Ил-12 ИФА (рис. 3C). Как показано на рис. 3С, значительное снижение способности производить Ил-12 (p40/p70) был обнаружен в T-РС по сравнению с N-РС (P <0,01). Возможность ОК-РС для производства Ил-12 был значительно выше, чем у Т-РС (P <0,05).

Торможение роста опухоли индуцированные внутриопухолевые Введение N-РС, Т-РС, и ОК-DC.
Several studies have reported that direct intratumoral injections of immature DCs elicit effective cellular immunity to the tumor via a CD8+ T cell-dependent mechanism (23, 24). To examine the antitumor effect of intratumoral injection with DCs, 1 × 107 N-DCs, T-DCs, or OK-DCs were injected into established Colon26 tumors on days 5 and 7 after tumor cell inoculation. As shown in Fig. 4A, N-DCs suppressed the growth of DC-treated tumors more significantly than did T-DCs (P < 0.05). OK-DCs significantly suppressed tumor growth compared with T-DCs (P < 0.05). To confirm the induction of systemic and therapeutic immunity, we examined the growth of the contralateral nontreated tumors, which were distant from the DC-treated tumors. As shown in Fig. 4B, significant suppression of tumor growth induced after intratumoral injections of N-DCs and OK-DCs was also observed in the noninjected tumors, compared with injection of T-DCs (P < 0.05 and P < 0.05, respectively). Next, to determine the therapeutic impact of systemic administration of OK-432 in tumor-bearing mice, we observed the prognosis of 12 mice treated with N-DCs, T-DCs, and OK-DCs. The 50-day survival rates after tumor inoculation were 75, 25, and 66%, respectively. The log-rank test revealed that treatment with N-DCs and OK-DCs prolonged survival significantly compared with treatment with T-DCs (P < 0.05 and P < 0.05, respectively; Fig. 4C).

Infiltration of CD8+ Cells in Tumor Tissues Obtained from Treated Mice.
To investigate effects of tumor-specific immunity, we resected the noninjected side tumors from mice treated with the three different subsets of DCs on the 7th day after final injection of DCs and performed immunohistochemical staining with anti-CD8 mAb (Fig. 5, A–C). The mean number of immunoreactive cells in five different fields revealed significant suppression of CD8+ cell infiltration in the tumors treated with T-DCs compared with those treated with N-DCs or OK-DCs (P < 0.005 and P < 0.05, respectively; Fig. 5D). Treatment of tumors with OK-DCs restored infiltration of CD8+ T cells as much as did treatment with N-DCs.

CTL Activity Induced by Intratumoral Injection of N-DCs, T-DCs, and OK-DCs.
To confirm the induction of systemic and specific antitumor immunity, we examined the CTL activity of splenocytes from the mice treated with DCs. Splenocytes cultured with parental tumor cells for 5 days were tested for antitumor CTL and NK activity by 4-h 51Cr-release assay. As shown in Fig. 6, intratumoral injection of N-DCs induced significant CTL activity against Colon26, as compared with injection of T-DCs. Treatment with OK-DCs induced significantly higher CTL activity than that of treatment with T-DCs. A low level of NK activity against YAC-1 cells was observed in both N-DC- and OK-DC-treated mice. No cytotoxic activity was observed against BALB/c syngeneic Meth-A tumor cells (data not shown). These results suggested that the CTL activity induced by treatment with OK-DCs appeared to be specific for Colon26 tumor.

Direct Effects of OK-432 to DCs: Analysis of Cell Surface Antigens.
To examine direct effects of OK-432 to DCs, we analyzed the expression of cell surface antigens using flow cytometric analysis. Eight-day-cultured, monocyte-derived DCs from normal control mice were subsequent cultured with or without OK-432 (0.1 KE/ml) for 48-h (designated OK-432-treated DCs and control DCs, respectively). Each DC was harvested, and we analyzed the expression of cell surface antigens by flow cytometry. Table 1 shows the percentage of positively stained cells and MCF intensities of each antigen. A significantly high expression of class II, CD80, and CD40 was detected in OK-432-treated DCs compared with that of control DCs. The similar tendency was observed using monocyte-derived DCs from tumor-bearing mice (data not shown).

Previous SectionNext SectionDiscussion
DC-based cancer immunotherapy has moved to the center stage in active immunotherapy (2, 3, 25). Adequate functioning of DCs is crucial for effective antitumor control and the success of cancer immunotherapy. The aim of this study was to determine whether the induction of Th1-dominant environment by systemic administrations of OK-432 to hosts with advanced malignant disease modulates the antitumor effect of DCs derived from the tumor-bearing hosts. In this study, we demonstrated successful biological modification of murine DCs with systemic administration of OK-432 to mice with advanced cancer. The following significant changes were found in DCs from the OK-432-treated tumor-bearing mice: (a) increased expression of MHC and costimulatory molecules; (b) increased antigen-presenting ability; and (c) increased ability to produce IL-12. Intratumoral injection of immature DCs from OK-432-treated mice thus enhanced induction of tumor-specific immunity, such as infiltration of CD8+ cells into tumor tissues, and resulted in effective suppression of tumor growth.

Recent studies have demonstrated that the Th1/Th2 balance controlled by Th1 or Th2 cells producing cytokines plays important roles in various immune responses, including antitumor immunity (17). Th1 cells producing IFN-γ and IL-2 are essential for the induction of cellular and tumor immunity, whereas Th2 cells producing IL-4, IL-6, and IL-10 are associated with suppression of cytolytic activity (26–28). Several studies have shown increased levels of Th2 type cytokines in the peripheral blood of tumor-bearing mice or cancer patients (29, 30). In particular, great changes in cytokine environments and subsequent immune dysfunction have been demonstrated in advanced malignant disease (31, 32), and increases in serum level of IL-6 and TGF-β are reported to be related to progression of malignant disease (33). In this study, we found significantly high levels of serum IL-4, IL-6, and relative Th2-dominant state in our tumor-bearing mouse model. As a reason for the inferior functions of the DCs from the tumor-bearing state (T-DCs), it is possible that the changes in cytokine environment lead to down-regulation of the entire metabolism of progenitor cells of DCs in the tumor-bearing mice and subsequent suppression of antitumor cellular immunity via DCs. Another reason for the dysfunction of T-DCs involves tumor-derived factors. Several studies have reported many tumor-derived factors, which affect the differentiation of DCs, IL-6 (34, 35), IL-10 (36, 37), TGF-β (38), and VEGF (39), and some studies have reported defective maturation and skewing differentiation of DCs in tumor-bearing hosts (10, 40, 41). In this study, we used the cultured DCs but not DCs directly purified from the mice. These findings indicated that exposure of the progenitor cells of DCs in mice with advanced malignant disease to a Th2-type cytokine dominant environment and tumor-derived factors affected the differentiation of DCs.

Recent studies have reported that there is functional heterogeneity of DCs regulated by systemic immune systems (42), and differentiation of DCs is thought to be affected by the cytokine microenvironment (43). DCs in a Th1-type, cytokine-dominant environment provide optimal effects on antigen-specific CTLs, whereas in a Th2-dominant state, such effects are suppressed (44). OK-432 is one of the biological response modifiers demonstrated to induce systemic Th1-dominant immunity in vivo and in vitro (16, 45). In the present study, as shown in Fig. 1, we successfully induced a Th1-dominant state in mouse models of advanced malignancy by repeated administration of OK-432, and we also restored the ability of the DCs from the OK-432-treated mice to induce optimal immune responses. These findings suggested that the induction of a Th1-dominant cytokine environment in tumor-bearing hosts with malignancies had a crucial role to elicit successful antitumor immune responses mediated by DCs.

OK-432 is a penicillin-killed streptococcal preparation, and it is reported to be a potent inducer of Th1-type cytokines (16). Recent studies have reported that a lipoteichoic acid-related molecule, designated OK-PSA, was isolated from OK-432 as a potent inducer of Th1-type cytokines (46). Moreover, OK-PSA was reported to be involved in toll-like receptors, which were expressed in myelomonocytic elements and play a fundamental role in pathogen recognition and activation of innate immunity (47, 48). It is possible that OK-PSA might have an effect on the progenitor cells of DCs, such as monocytes, in the OK-432-treated cachectic mice and improve their function to elicit antitumor immune responses.

Therefore, we propose the following possibilities in addressing the mechanism underlying our successful therapeutic model of mice with advanced malignant disease. In tumor-bearing mice, the progenitor cells of DCs were exposed to a Th2-biasing environment and tumor-derived suppressors such as IL-4 and IL-6; subsequently, these factors had an effect on the differentiation of progenitors, whereas in OK-432-treated tumor-bearing mice, repeated administration of OK-432 affected some kinds of immune cells such as T cells, NK cells, and macrophages, which induced a Th1-biasing environment around the progenitors of DCs. These cytokine environments differentiated the progenitors to potent DCs that were able to induce optimal antitumor immunity. Another possibility was proposed that OK-PSA, an effective component of OK-432, directly affected progenitor cells of DCs in myelomonocytic elements through toll-like receptor signaling and caused the differentiation of the cells suitable for an induction of cellular immunity to tumors. With an in vitro assay, we showed the progression of DC maturation in the presence of OK-432 on DC surface molecules (Table 1).

Принимая во внимание эффективность иммунотерапии опухолей, развитие эффективных методов преодоления иммунной дисфункции у опухолями хостов является одним из наиболее важных факторов в успешной иммунотерапии. Например, модификация РС требуется для повышения противоопухолевой активности округ Колумбия, иммунотерапия у больных со злокачественными заболеваниями. Комбинированные администрации ДК с цитокинов, хемокинов, модификаторы биологической реакции, или апоптоз-индуцирующих агентов дало обнадеживающие результаты как в пробирке и в естественных условиях (24, 49-51). Кроме того, генетическая модификация РС выразить опухолевых антигенов, цитокинов, хемокинов и встретился с успехом в лечении опухоли доклинических моделях на животных (23, 52, 53). Мы обнаружили, что Th1-доминирующей иммунитета индуцированные системное введение ОК-432 в опухолевых Саваоф рациональная стратегия для DC-основанная рака иммунотерапия. На основе этих выводов, мы планируем подать заявку на использование ОК-432 в округ Колумбия, вакцинации больных раком.

Предыдущий разделСледующий раздел

Просмотр увеличенной версии:
На этой странице В новом окне
Скачать как слайдов PowerPoint Рис. 1.
Убойном весе и уровни цитокинов сыворотки нормальных, Colon26-20-подшипник и ОК-432-лечение Colon26-20-мышей, обозначенный как N-мышей, T-мышей, и ОК-мышей, соответственно. Когда мыши были принесены в жертву для получения домена, туша весом были определены после резекции опухолей (). В то же время, сыворотка была получена от мышей, и сыворотки цитокинов (IL-4, IL-6, IFN-γ и TNF-α) уровни были измерены методом ИФА (B-E). Каждая группа состояла из шести мышей. В Colon26-20-мышей, значительная потеря веса и значительная высокой сыворотке ИЛ-6 были обнаружены уровни по сравнению с теми, в нормальных и ОК-432-обработанных мышей ( и B). Высокий уровень IFN-γ наблюдалось в ОК-432-лечение опухолей мышей (C). В опухоли мышей, значительное высокий уровень IL-4 и ФНО-α было также отмечено, по сравнению с нормальной контрольных мышей (D и E). *, Р <0,05; **, Р <0,01; ***, P <0,001. Бары, SD. F, внутриклеточных цитокинов окрашивания клеток селезенки мышей из трех различных групп. Клетки селезенки были получены, когда мыши были принесены в жертву для получения домена, взвешенных в питательной среде в 106/ мл, и стимулировали с SEB, rmIL-2, и rmIL-4. После 6 дней культуры SEB, собранных клеток были стимулированы форболового 12-миристат 13-ацетата и иономицина в присутствии GolgiStop в течение 3 ч. Для окрашивания, следующие моноклональных антител были использованы: FITC-сопряженных анти-mIFN-γ, PE-сопряженных анти-MIL-4; PerCP-сопряженных анти-CD4, а также надлежащего контроля изотипных. Десять тысяч CD4+ клетки были собраны для каждого образца, и цитоплазматической экспрессии цитокинов определяли методом проточной цитометрии анализа. Цифры показывают процент Th1 (ИФН-γ)-или Th2 (IL-4)-положительных клеток. Системное введение ОК-432 индуцированной Th1-доминантных состояний в Colon26-20-мышей. В отличие от опухоли мышей, были в Th2-доминантных состояний. Результаты представителя из трех отдельных экспериментов.


Просмотр увеличенной версии:
На этой странице В новом окне
Скачать как слайдов PowerPoint Рис. 2.
Фенотипическая рассмотрения N-РС, Т-РС, и OK-домена с использованием проточной цитометрии анализа. РС окрашивали моноклональных антител, как описано в разделе "Материалы и методы", и MCF интенсивности были сопоставлены между РС из трех различных групп мышей. Значительно низким уровнем экспрессии класса II, CD80, CD86 и был обнаружен в T-РС по сравнению с N-DC. В ОК-РС, значительно высоким уровнем экспрессии класса II и CD80 была обнаружена. FITC-сопряженных анти-CD11c МКА был использован для ворот на CD11c яркие населения РС. Все эти клетки могут быть рассмотрены незрелые ДК, потому что они высокая экспрессия CD11c и низкий уровень экспрессии CD40. Десять тысяч клетки были собраны для каждого образца, и данные были проанализированы с программным обеспечением CellQuest. Результаты были даны в качестве средства, бары, SD. Аналогичные результаты были получены в течение четырех экспериментов. *, Р <0,05; **, Р <0,01; ***, P <0,005.


Просмотр увеличенной версии:
На этой странице В новом окне
Скачать как слайдов PowerPoint Рис. 3.
, FITC-декстран поглощение N-РС, Т-РС, и ОК-DC. Существовал никаких существенных различий в возможность захвата антигенов. Результаты также поддерживается, что все эти клетки могут быть рассмотрены незрелые ДК, на которой экспонировались способность endocytose. DC три подмножества культивировали при любом 0 ° С (белый гистограмм) или 37 ° C (черный гистограмм) в течение 90 минут в присутствии FITC-меченого декстрана (1 мг / мл). Клетки контрастно с CD11c-PE, и внутриклеточного накопления FITC-декстрана на CD11c+ населения определяется цитометрический анализа. Цифры указывают относительные интенсивности MCF для лейбла FITC при 37 ° C минус, что при 0 ° C. Аналогичные результаты были получены для трех экспериментов, и представитель результаты представлены. B, стимулирование деятельности ДК в аллогенной MLR. РС от Colon26-20-мышей (T-DC) выставлены уступает способность генерировать alloreactivity, в то время как РС от ОК-432-обработанных мышей (ОК-DC) выставлены начальник стимулирующей деятельности. Митомицин С обработанных РС от трех групп BALB / C мышей (Н-2D) были оценены в MLR с спленоцитов из C57BL / 6 (H-2б) в качестве респондентов. Числа клеток ответчика были постоянными, и DC номера были разнообразны. После 5-дневного coculture, пролиферацию Т-клеток определяли по поглощению BrdUrd. Результаты были даны в качестве средства для трех культур; бары, SD. Аналогичные результаты были получены в течение трех экспериментов. *, Р <0,05; **, P <0,01 для N-домена или ОК-РС в сравнении с Т-ДК. C, Ил-12 (p40 p70) производства по РС. Возможность ОК-РС для производства Ил-12 был значительно выше, чем у Т-РС (P <0,05). N-РС, Т-РС, и ОК-РС инкубировали в культуральной среде с CD40L в течение 72 ч, и Ил-12 выделяется в супернатантов была количественно цитокинов конкретных Ил-12 ELISA. Результаты представлены в качестве средства для трех культур; бары, SD. Аналогичные результаты были получены в течение трех экспериментов. *, Р <0,05; **, P <0,01.


Просмотр увеличенной версии:
На этой странице В новом окне
Скачать как слайдов PowerPoint Рис. 4.
В естественных условиях противоопухолевый эффект индуцированного внутриопухолевые инъекция незрелые ДК. Прямая внутриопухолевые инъекции ОК-РС дали восстановление противоопухолевой эффекты, наблюдаемые с помощью T-DC. В день 0, BALB / C мышей получил 5 × 105 Colon26 клеток в флангов двусторонней, а затем получали инъекции в дни 5 и 7 с 1 × 107 незрелых РС (N-РС, Т-РС, и ОК-DC) приостановлены в HBSS и вводят в левый фланг интратуморально. Контрольная группа получала HBSS в одиночку. Размер опухолей был записан как объем опухоли путем измерения крупнейших перпендикулярных диаметра и высоты. , вводили стороны; B, noninjected стороны. Данные предоставляются как средний объем опухоли 6-12 мышей / группы; бары, SD. Достоверность различий между группами была проанализирована с помощью повторных измерений ANOVA. * P <0,05. C, прогноз мышей, получавших инъекции внутриопухолевые незрелых ДК. Выживание было наблюдать во времени после прививки опухоли. Статистический анализ результатов ранга журнала тестирования показали, что мышей с N-домена или ОК-РС имели значительно лучший прогноз, чем у пациентов, получавших T-DC. * P <0,05.


Просмотр увеличенной версии:
На этой странице В новом окне
Скачать как слайдов PowerPoint Рис. 5.
Инфильтрация CD8+ клеток в опухоли noninjected найденным мышей с РС. Cryosections опухолевой ткани в noninjected стороны окрашивали анти-CD8 МАБ. Подробнее иммунореактивного клетки были обнаружены в опухолях получены от мышей с N-РС () и ОК-РС (С), чем у мышей с опухолями лечение с Т-РС (B). Аналогичные результаты были получены в течение четырех экспериментов. D, среднее число CD8+ клетки проникают в ткани опухоли noninjected были рассчитывать на пяти различных полей на × 200. Значительно больше CD8 + клеток были обнаружены в опухолях мышей с N-ДК и ОК-РС, чем в опухолях с T-DC-обработанных мышей. Результаты представлены в качестве средств в пяти различных областях, бары, SD. *, Р <0,05; **, P <0,005.


Просмотр увеличенной версии:
На этой странице В новом окне
Скачать как слайдов PowerPoint Рис. 6.
Противоопухолевой активности ЦТЛ обнаружены в спленоцитов найденным мышей, три различные подмножества DC (N-РС, Т-РС, и ОК-DC). Спленоциты от мышей с N-РС (), Т-РС (B), и ОК-РС (C) были restimulated митомицином С обработанных родительских клеток опухоли и были проверены 5 дней спустя в 51-релиз анализа Cr. Спленоциты от мышей с N-РС показали значительную активность ЦТЛ против Colon26, по сравнению с Т-DC-вводили мышам. ОК-индуцированной РС значительно выше, CTL деятельности, чем у мышей, получавших с T-DC. Низкий уровень НК деятельности против МЦ-1-клетки были обнаружены в обоих N-DC-и ОК-DC-обработанных мышей. Аналогичные результаты были получены в трех отдельных экспериментов. Данные представлены в качестве средства для трех образцов, бары, SD.

Открыть эту таблицу:
В этом окне В новом окне Таблица 1
В пробирке ОК-432-лечение РС показывают изменение поверхности фенотип

Предыдущий разделСледующий разделБлагодарности
Мы благодарны К. Сато, Дж. Мияке, К. Огата, Т. Shimooka за отличную техническую помощь.

Предыдущий разделСледующий разделСноски
↵1 Работа выполнена при частичной поддержке грантов-в-помощь по научным исследованиям по приоритетным направлениям развития рака 12215116, 11671251, 12218227 и; грантов-в-помощь по научным исследованиям (B) 12557100 и 12470241 и (C) 12213101, 12671232 , и 12670166); Грант-в-помощь для поисковых исследований 13877188; и Министерство образования, культуры, спорта, науки и технологии Японии. Это была работа также была поддержана Уэхара Мемориальный фонд, Фонд Наито, Casio науки Фонд Поощрения, Фонд содействия развитию исследований рака в Японии, и Сагава Фонд содействия развитию раковых исследований.
↵2 Кому запросы перепечатки должны быть рассмотрены, в отделение хирургии, Медицинский институт биорегуляции, Университет Кюсю, 4546 Tsurumibaru, Беппу 874-0838, Япония. Телефон: 81-977-27-1650; Факс: 81-977-27-1651; электронная почта: mmori@beppu.kyushu-u.ac.jp
↵3 сокращений являются: DC, дендритные клетки, NK, естественных киллеров, ИЛ, интерлейкин; Th, Т-хелперов; К.Е., Klinishche Einheit; МАБ, моноклональные антитела, CM, культуры среды, RM, рекомбинантный мышиный; SEB, Стафилококковые золотистого энтеротоксина B; МАБ, моноклональные антитела, PE, фикоэритрином; MLR, смешанная реакция лимфоцитов; CD40L, CD40 лиганда; MCF, средний канал флуоресценции; BrdUrd, 5-бром-2-dexyuridine; PerCP, перидинина хлорофилла белка.

Принято 26 июня 2002. Поступила в редакцию 26 ноября 2001. Версия получил 29 апреля 2002 года. Терапия рака Молекулярный Предыдущий раздел Список литературы
↵ Mellman И., Штейнман, Р. дендритных клеток: специализированные и регулируется машин для обработки антигена.сотовый , 106: 255 -258,2001 .CrossRefMedline↵ Banchereau, J., Шулер-Thurner, Б., Palucka, К., Шулер, Г. Дендритные клетки в качестве векторов для терапии.сотовый , 106: 271 -274,2001 .CrossRefMedline↵ Штейнман, RM, и Dhodapkar, М. Активная иммунизация против рака с дендритные клетки: ближайшее время.Int. J. Cancer , 94: 459 -473,2001 .CrossRefMedline↵ Bellone, М., Iezzi Г., ВМРО, штат Массачусетс, и Протти, депутат рака иммунотерапии: синтетических и природных пептидов в балансе.Immunol. Сегодня , 20: 457 -462,1999 .CrossRefMedline↵ Sadanaga, Н., Нагасима, H., машино К., Тахара, К., Ямагучи, H., Охта, М., Фуджие, Т. Танака, Ф., Иноуэ Х., Takesako, К., Акиеси, Т., и Мори, М. дендритных клеток вакцинации с магом пептид новый терапевтический подход для желудочно-кишечного рака.Clin. Cancer Res. , 7: 2277 -2284,2001 .Аннотация/БЕСПЛАТНО Полный текстNestle, ПО, Alijagic С., Gilliet, М., Sun, Y., Граббе, С., Даммер Р., Burg, Г., и Schadendorf, Д. Вакцинация больных меланомой с пептид-или опухоли лизат- импульсного дендритные клетки.Nat. Med. , 4: 328 -332,1998 .CrossRefMedline↵ Thurner, Б., Haendle И., Родер, К., Дикман, Д., Keikavoussi П., Jonuleit, H., Бендер, А., Maczek, C, Шрайнер Д., фон, плотность Дриш, П., Брокер, Е.Б., Штейнман, RM, Enk А., Kampgen Е., Шулер, Г. Вакцинация Маг-3A1 пептид-импульсной зрелой, моноцитарных дендритные клетки расширяется специфических цитотоксических Т-клеток и вызывает регрессию некоторые метастазы в странах с развитой IV стадии меланомы.J. Опыт. Med. , 190: 1669 -1678,1999 .Аннотация/БЕСПЛАТНО Полный текст↵ Gabrilovich, D. I., Corak, J., Ciernik, I. F., Kavanaugh, D., and Carbone, D. P. Decreased antigen presentation by dendritic cells in patients with breast cancer.Clin. Cancer Res. , 3: 483 –490,1997 .AbstractKiertscher, S. M., Luo, J., Dubinett, S. M., and Roth, M. D. Tumors promote altered maturation and early apoptosis of monocyte-derived dendritic cells.J. Immunol. , 164: 1269 –1276,2000 .Abstract/FREE Full Text↵ Almand, B., Resser, J. R., Lindman, B., Nadaf, S., Clark, J. I., Kwon, E. D., Carbone, D. P., and Gabrilovich, D. I. Clinical significance of defective dendritic cell differentiation in cancer.Clin. Cancer Res. , 6: 1755 –1766,2000 .Abstract/FREE Full Text↵ Shitara, K., Ichimura, O., Mitsuno, T., and Osawa, T. Natural killer (NK) cell activating factor released from murine thymocytes stimulated with an anti-tumor streptococcal preparation, OK- 432.J. Immunol. , 134: 1039 –1047,1985 .Abstract↵ Tanaka, N., Gouchi, A., Ohara, T., Mannami, T., Konaga, E., Fuchimoto, S., Okamura, S., Sato, K., and Orita, K. Intratumoral injection of a streptococcal preparation, OK-432, before surgery for gastric cancer. A randomized trial. Cooperative Study Group of Preoperative Intratumoral Immunotherapy for Cancer.Cancer (Phila.) , 74: 3097 –3103,1994 .CrossRefMedline↵ Katano, M., and Morisaki, T. The past, the present and future of the OK-432 therapy for patients with malignant effusions.Anticancer Res. , 18: 3917 –3925,1998 .Medline↵ Oshimi, K., Kano, S., Takaku, F., and Okumura, K. Augmentation of mouse natural killer cell activity by a streptococcal preparation, OK-432.J. Natl. Cancer Inst. , 65: 1265 –1269,1980 .
↵ Misaki, T., Watanabe, Y., Iida, Y., Hidaka, A., Kasagi, K., Fukushima, H., and Konishi, J. Recruitment of T lymphocytes and induction of tumor necrosis factor in thyroid cancer by a local immunotherapy.Cancer Immunol. Immunother. , 35: 92 –96,1992 .CrossRefMedline↵ Fujimoto, T., Duda, R. B., Szilvasi, A., Chen, X., Mai, M., and O’Donnell, M. A. Streptococcal preparation OK-432 is a potent inducer of IL-12 and a T helper cell 1 dominant state.J. Immunol. , 158: 5619 –5626,1997 .Abstract↵ Nishimura, T., Iwakabe, K., Sekimoto, M., Ohmi, Y., Yahata, T., Nakui, M., Sato, T., Habu, S., Tashiro, H., Sato, M., and Ohta, A. Distinct role of antigen-specific T helper type 1 (Th1) and Th2 cells in tumor eradication in vivo.J. Exp. Med. , 190: 617 –627,1999 .Abstract/FREE Full Text↵ Fujimoto-Ouchi, K., Tamura, S., Mori, K., Tanaka, Y., and Ishitsuka, H. Establishment and characterization of cachexia-inducing and -non-inducing clones of murine Colon26 carcinoma.Int. J. Cancer , 61: 522 –528,1995 .Medline↵ Schreurs, M. W., Eggert, A. A., de Boer, A. J., Figdor, C. G., and Adema, G. J. Generation and functional characterization of mouse monocyte-derived dendritic cells.Eur. J. Immunol. , 29: 2835 –2841,1999 .CrossRefMedline↵ Openshaw, P., Murphy, E. E., Hosken, N. A., Maino, V., Davis, K., Murphy, K., and O’Garra. A. Heterogeneity of intracellular cytokine synthesis at the single-cell level in polarized T helper 1 and T helper 2 populations.J. Exp. Med. , 182: 1357 –1367,1995 .Abstract/FREE Full Text↵ Sallusto, F., Cella, M., Danieli, C., and Lanzavecchia, A. Dendritic cells use macropinocytosis and the mannose receptor to concentrate macromolecules in the major histocompatibility complex class II compartment: downregulation by cytokines and bacterial products.J. Exp. Med. , 182: 389 –400,1995 .Abstract/FREE Full Text↵ Porstmann, T., Ternynck, T., and Avrameas, S. Quantitation of 5-bromo-2-deoxyuridine incorporation into DNA: an enzyme immunoassay for the assessment of the lymphoid cell proliferative response.J. Immunol. Methods , 82: 169 –179,1985 .CrossRefMedline↵ Nishioka, Y., Hirao, M., Robbins, P. D., Lotze, M. T., and Tahara, H. Induction of systemic and therapeutic antitumor immunity using intratumoral injection of dendritic cells genetically modified to express interleukin 12.Cancer Res. , 59: 4035 –4041,1999 .Abstract/FREE Full Text↵ Candido, K. A., Shimizu, K., McLaughlin, J. C., Kunkel, R., Fuller, J. A., Redman, B. G., Thomas, E. K., Nickoloff, B. J., and Mule, J. J. Local administration of dendritic cells inhibits established breast tumor growth: implications for apoptosis-inducing agents.Cancer Res. , 61: 228 –236,2001 .Abstract/FREE Full Text↵ Nestle, F. O., Banchereau, J., and Hart, D. Dendritic cells: on the move from bench to bedside.Nat. Med. , 7: 761 –765,2001 .CrossRefMedline↵ Restifo, N. P., Spiess, P. J., Karp, S. E., Mule, J. J., and Rosenberg, S. A. A nonimmunogenic sarcoma transduced with the cDNA for interferon γ elicits CD8+ T cells against the wild-type tumor: correlation with antigen presentation capability.J. Exp. Med. , 175: 1423 –1431,1992 .Abstract/FREE Full TextPaul, W. E., and Seder, R. A. Lymphocyte responses and cytokines.Cell , 76: 241 –251,1994 .CrossRefMedline↵ Sadanaga, N., Nagoshi, M., Lederer, J. A., Joo, H. G., Eberlein, T. J., and Goedegebuure, P. S. Local secretion of IFN-γ induces an antitumor response: comparison between T cells plus IL-2 and IFN-γ transfected tumor cells.J. Immunother. , 22: 315 –323,1999 .
↵ Maeda, H., and Shiraishi, A. TGF-β contributes to the shift toward Th2-type responses through direct and IL-10-mediated pathways in tumor-bearing mice.J. Immunol. , 156: 73 –78,1996 .Abstract↵ Pellegrini, P., Berghella, A. M., Del Beato, T., Cicia, S., Adorno, D., and Casciani, C. U. Disregulation in TH1 and TH2 subsets of CD4+ T cells in peripheral blood of colorectal cancer patients and involvement in cancer establishment and progression.Cancer Immunol. Immunother. , 42: 1 –8,1996 .CrossRefMedline↵ Kiessling, R., Wasserman, K., Horiguchi, S., Kono, K., Sjoberg, J., Pisa, P., and Petersson, M. Tumor-induced immune dysfunction.Cancer Immunol. Immunother. , 48: 353 –362,1999 .CrossRefMedline↵ Tisdale, M. J. Biology of cachexia.J. Natl. Cancer Inst. , 89: 1763 –1773,1997 .Abstract/FREE Full Text↵ Tanaka, M., Miyazaki, H., Takeda, Y., and Takeo, S. Detection of serum cytokine levels in experimental cancer cachexia of Colon26 adenocarcinoma-bearing mice.Cancer Lett. , 72: 65 –70,1993 .CrossRefMedline↵ Menetrier-Caux, C., Montmain, G., Dieu, M. C., Bain, C., Favrot, M. C., Caux, C., and Blay, J. Y. Inhibition of the differentiation of dendritic cells from CD34(+) progenitors by tumor cells: role of interleukin-6 and macrophage colony-stimulating factor.Blood , 92: 4778 –4791,1998 .Abstract/FREE Full Text↵ Mitani, H., Katayama, N., Araki, H., Ohishi, K., Kobayashi, K., Suzuki, H., Nishii, K., Masuya, M., Yasukawa, K., Minami, N., and Shiku, H. Activity of interleukin 6 in the differentiation of monocytes to macrophages and dendritic cells.Br. J. Haematol. , 109: 288 –295,2000 .CrossRefMedline↵ Rouleau, M., Cottrez, F., Bigler, M., Antonenko, S., Carballido, J. M., Zlotnik, A., Roncarolo, M. G., and Groux, H. IL-10 transgenic mice present a defect in T cell development reminiscent of SCID patients.J. Immunol. , 163: 1420 –1427,1999 .Abstract/FREE Full Text↵ Sharma, S., Stolina, M., Lin, Y., Gardner, B., Miller, P. W., Kronenberg, M., and Dubinett, S. M. T cell-derived IL-10 promotes lung cancer growth by suppressing both T cell and APC function.J. Immunol. , 163: 5020 –5028,1999 .Abstract/FREE Full Text↵ Maeda, H., Kuwahara, H., Ichimura, Y., Ohtsuki, M., Kurakata, S., and Shiraishi, A. TGF-β enhances macrophage ability to produce IL-10 in normal and tumor-bearing mice.J. Immunol. , 155: 4926 –4932,1995 .Abstract↵ Gabrilovich, D. I., Chen, H. L., Girgis, K. R., Cunningham, H. T., Meny, G. M., Nadaf, S., Kavanaugh, D., and Carbone, D. P. Production of vascular endothelial growth factor by human tumors inhibits the functional maturation of dendritic cells.Nat. Med. , 2: 1096 –1103,1996 .CrossRefMedline↵ Ishida, T., Oyama, T., Carbone, D. P., and Gabrilovich, D. I. Defective function of Langerhans cells in tumor-bearing animals is the result of defective maturation from hemopoietic progenitors.J. Immunol. , 161: 4842 –4851,1998 .Abstract/FREE Full Text↵ Almand, B., Clark, J. I., Nikitina, E., van Beynen, J., English, N. R., Knight, S. C., Carbone, D. P., and Gabrilovich, D. I. Increased production of immature myeloid cells in cancer patients: a mechanism of immunosuppression in cancer.J. Immunol. , 166: 678 –689,2001 .Abstract/FREE Full Text↵ Rissoan, M. C., Soumelis, V., Kadowaki, N., Grouard, G., Briere, F., de Waal Malefyt, R., and Liu, Y. J. Reciprocal control of T helper cell and dendritic cell differentiation.Science (Wash. DC) , 283: 1183 –1186,1999 .Abstract/FREE Full Text↵ Sato, M., Iwakabe, K., Kimura, S., and Nishimura, T. Functional skewing of bone marrow-derived dendritic cells by Th1- or Th2-inducing cytokines.Immunol. Lett. , 67: 63 –68,1999 .CrossRefMedline↵ Sato, M., Iwakabe, K., Ohta, A., Sekimoto, M., Nakui, M., Koda, T., Kimura, S., and Nishimura, T. Functional heterogeneity among bone marrow-derived dendritic cells conditioned by T(h)1- and T(h)2-biasing cytokines for the generation of allogeneic cytotoxic T lymphocytes.Int. Immunol. , 12: 335 –342,2000 .Abstract/FREE Full Text↵ Okamoto, T., Harada, M., Tamada, K., Yoshida, H., Ito, O., Kong, Y. Y., Takenoyama, M., Hirashima, C., Matsuzaki, G., and Nomoto, K. Local injection of OK432 can augment the TH1-type T-cell response in tumor-draining lymph node cells and increase their immunotherapeutical potential.Int. J. Cancer , 70: 598 –605,1997 .CrossRefMedline↵ Okamoto, M., Oshikawa, T., Ohe, G., Furuichi, S., Nishikawa, H., Tano, T., Bando, T., Yoshida, H., Matsubara, S., Matsuno, T., Saito, M., and Sato, M. Comparison of cytokine-inducing activity in a lipoteichoic acid-related molecule isolated from a penicillin-killed group A Streptococcus and from untreated bacteria.Int. Immunopharmacol. , 1: 1957 –1968,2001 .CrossRefMedline↵ Okamoto, M., Oshikawa, T., Ohe, G., Nishikawa, H., Furuichi, S., Tano, T., Moriya, Y., Saito, M., and Sato, M. Severe impairment of anti-cancer effect of lipoteichoic acid-related molecule isolated from a penicillin-killed Streptococcus pyogenes in toll-like receptor 4-deficient mice.Int. Immunopharmacol. , 1: 789 –1795,2001 .
↵ Muzio, M., Bosisio, D., Polentarutti, N., D’Amico, G., Stoppacciaro, A., Mancinelli, R., van’t Veer, C., Penton-Rol, G., Ruco, L. P., Allavena, P., and Mantovani, A. Differential expression and regulation of toll-like receptors (TLR) in human leukocytes: selective expression of TLR3 in dendritic cells.J. Immunol. , 164: 5998 –6004,2000 .Abstract/FREE Full Text↵ Tanaka, F., Hashimoto, W., Okamura, H., Robbins, P. D., Lotze, M. T., and Tahara, H. Rapid generation of potent and tumor-specific cytotoxic T lymphocytes by interleukin 18 using dendritic cells and natural killer cells.Cancer Res. , 60: 4838 –4844,2000 .Abstract/FREE Full TextShimizu, K., Fields, R. C., Giedlin, M., and Mule, J. J. Systemic administration of interleukin 2 enhances the therapeutic efficacy of dendritic cell-based tumor vaccines.Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 96: 2268 –2273,1999 .Abstract/FREE Full Text↵ Kirk, C. J., Hartigan-O’Connor, D., Nickoloff, B. J., Chamberlain, J. S., Giedlin, M., Aukerman, L., and Mule, J. J. T cell-dependent antitumor immunity mediated by secondary lymphoid tissue chemokine: augmentation of dendritic cell-based immunotherapy.Cancer Res. , 61: 2062 –2070,2001 .Abstract/FREE Full Text↵ Song, W., Kong, H. L., Carpenter, H., Torii, H., Granstein, R., Rafii, S., Moore, M. A., and Crystal, R. G. Dendritic cells genetically modified with an adenovirus vector encoding the cDNA for a model antigen induce protective and therapeutic antitumor immunity.J. Exp. Med. , 186: 1247 –1256,1997 .Abstract/FREE Full Text↵ Curiel-Lewandrowski, C., Mahnke, K., Labeur, M., Roters, B., Schmidt, W., Granstein, R. D., Luger, T. A., Schwarz, T., and Grabbe, S. Transfection of immature murine bone marrow-derived dendritic cells with the granulocyte-macrophage colony-stimulating factor gene potently enhances their in vivo antigen-presenting capacity.J. Immunol. , 163: 174 –183,1999 .Abstract/FREE Full TextCiteULike Complore Connotea Del.icio.us Digg Facebook Reddit Technorati Twitter
What's this?
http://mct.aacrjournals.org/content/1/10/785.full